本书是以现代生物化学和分子生物学的基础知识为主体而编写的实验指导教材。在实验教学改革的指导下,弱化了一些传统的验证性试验,着重训练学生的动手能力和科研思维的形成,提高学生的专业素养以及在考研、就业中的竞争力。
全书共分为三部分,前两部分侧重于理论,第三部分为实验部分。在理论部分,介绍了生物化学和分子生物学的基本知识,常用实验技术及其原理,使得学生在开始实验前能够对实验涉及的技术有一个理论层面的认识。第三部分精选了29个实验,覆盖面广,使得学生能够全面掌握常用的生物化学与分子生物学实验技术,各学校可以酌情选用。附录中包括了常用生物化学试剂的配制方法。
本书适合临床医学、医学检验、影像学、预防医学、生物科学、生物技术等相关学科的本科学生使用。
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生物化学与分子生物学是生命科学中发展迅速的基础学科,它的理论和技术已渗透至基础医学和临床医学的各个领域,并衍生出了许多新兴的交叉学科,如分子免疫学、分子微生物学、分子遗传学、分子药理学等。目前,这门学科已展示出极大的发展潜力和极其广阔的应用前景。实验教学是高校教学工作中一个重要的组成部分,它是培养学生实践能力和创新能力的重要环节,也是提高学生专业素养和就业竞争力的重要途径。
本教材是以培养学生学习生物化学与分子生物学实验技能为主要目的的实验指导书。遵循先理论后实践的原则,编写的宗旨为简明、实用。我们以实验教学改革为指导,加强了生物化学基本技能训练和综合性实验。全书分为三大部分:第一部分简要介绍生物化学实验的基本知识;第二部分为生物化学与分子生物学基本实验原理和技术,其中包括分光光度技术、离心技术、层析技术、电泳技术和其他分子生物学基本技术;第三部分为生物化学与分子生物学实验。各学校可根据不同教学层次和对象、实验教学课时酌情选用。附录列出常用生物化学试剂的配制方法,可供有关人员查阅参考。本实验指导主要是为配合基础生物化学教材而编写,所涉及的技术面比较广泛,可供临床医学、医学检验、影像学、预防医学、生物科学、生物技术等相关学科本科学生使用。
参加本教材编写的人员主要是广州医学院生物化学与分子生物学教研室教学一线的教师,他们具有多年的教学工作经验,为本书编写投入了大量的精力。另外,化学工业出版社在编辑加工中做了大量细致的工作,在此对他们表示衷心感谢!
由于编写本教材的时间仓促,编者水平有限,书中难免出现疏漏和不足之处,恳请广大读者不断向我们提供宝贵的批评和建议,不胜感激。
编者
2008年1月 |
第一部分生物化学与分子生物学实验基本知识1
第一节生物化学与分子生物学实验室规则1
第二节生物化学实验的基本操作3
第二部分生物化学与分子生物学实验原理与技术7
第一节分光光度法7
第二节离心技术15
第三节层析技术27
第四节电泳41
第五节分子克隆49
第六节聚合酶链式反应(PCR)54
第七节核酸分子杂交技术62
第三部分生物化学与分子生物学实验71
第一节生物化学基本实验71
实验1双缩脲法测定蛋白质浓度71
实验2Folin酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质浓度74
实验3考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量76
实验4紫外分光光度法测定蛋白质79
实验5血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳81
实验6预染血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳86
实验7聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清乳酸脱氢酶同工酶88
实验8SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)92
实验9等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点97
实验10影响酶活性的因素100
实验11蔗糖酶的专一性103
实验12底物浓度对酶促反应速度的影响——过氧化氢酶Km的测定105
实验13抑制剂对酶促反应速度的影响109
实验14血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定(赖氏法)111
实验15血清甘油三酯含量的测定——乙酰丙酮法114
实验16血浆高密度脂蛋白(HDL)胆固醇含量的测定116
实验17酮体的生成118
实验18运动对全血乳酸含量的影响120
第二节生物化学综合实验122
实验19激素对血糖浓度的影响122
实验20血清γ球蛋白的分离与纯度鉴定126
实验21血清清蛋白的分离及电泳鉴定130
实验22核酸的分离提取、成分鉴定及含量测定133
第三节分子生物学实验148
实验23大肠杆菌感受态细胞制备及外源DNA的转化148
实验24质粒DNA的提取152
实验25质粒DNA的限制性内切酶酶切154
实验26DNA的琼脂糖凝胶电泳157
实验27PCR基因扩增159
实验28Southern杂交分析162
实验29Northern杂交分析166
附录169
附录Ⅰ化学试剂分级及注意事项169
附录Ⅱ常用缓冲液配制方法170
附录Ⅲ重铬酸洗液的配制与再生173
参考文献175
第一部分生物化学与分子生物学实验基本知识1
第一节生物化学与分子生物学实验室规则1
第二节生物化学实验的基本操作3
第二部分生物化学与分子生物学实验原理与技术7
第一节分光光度法7
第三部分生物化学与分子生物学实验15
第一节生物化学基本实验15
实验1双缩脲法测定蛋白质浓度15
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本书适合临床医学、医学检验、影像学、预防医学、生物科学、生物技术等相关学科的本科学生使用。
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