本书在广受欢迎的第一版的基础上修订、更新而成。在进行内容更新的同时，继续保持上版简明、实用、可操作性强的特点，对当前国内外先进的药理实验方法与技术进行了“step—bV—step”的说明。本书内容简明、新颖 收录的药理学实验方法为目前药理学研究中的热点领域，所涉方法为当前国内外使用最多或新近发展突出的方法。
方法实用、详尽 所收录的方法对实验动物、材料与试剂、方法、注意事项、结果、评价进行了具体的介绍，“方法”部分尤为详细。特别是，大多数实验还列出了实验的观测指标，并且对检查观测指标的具体方法与详细步骤进行了说明。 |
人类生命科学研究的新思路、新技术和新方法不断发展，为药理学研究提供了新的技术和方法，同时也极大地促进了药理学研究的进展。本书编写的宗旨，就是应用生命科学研究的新技术、新方法，研究物质的药理学作用及其分子机理。
本书第一版自2003年6月出版，受到广大读者的欢迎，出版社多次印刷发行。在经过4年后，作者应出版社之邀，再次组织有关专家们进行修订、改版。在修订的过程中，我们深感再版的责任与压力。我们力求做到：①继续突出分子水平的研究，为研究物质的作用靶点和分子机理提供可行的实验方法；②强调新颖性的同时，更加突出实用性，在介绍一类药理学实验研究时，尽量多介绍几种实验方法，使读者能根据自己实际研究中的仪器、设备等条件，灵活选用实验方法；③保持精练性，删减了一些实践下来较陈旧的方法，增加了大量新的方法。在第一版的基础上，本版增加的全新章节包括：抗衰老药理实验方法、降血糖药理实验方法、神经系统药理实验方法、造血系统药理实验方法和中医证的模型实验方法。
当然，药理学研究的领域广泛，方法学的发展更是日新月异，本书不可能囊括所有。本书如能对读者有所启示，供其借鉴，则将是作者的最大荣幸!药理实验研究，往往困难重重、失败累累，尽管本书中介绍的方法均经过作者们亲自实践总结，但读者难免还会在实验中遇到不顺。因此我们衷心地希望读者提出批评和指正!
感谢各位同仁和化学工业出版社的编辑对本书的大力支持!感谢各位作者做出的贡献!感谢华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室对本书的支持!
刘建文2007年10月 |
第1章引言1
11离体实验和在体实验1
12药理学技术新进展2
121受体技术与药物筛选3
122转基因动物与药物筛选7
123基因探针技术与药物筛选12
124基因芯片与药物筛选14
125药物基因组学18
126蛋白质组学与药物筛选研究19
127代谢组学与药理新进展21
128系统生物学与新药开发22
参考文献24
第2章抗肿瘤药理实验方法26
21移植性肿瘤整体动物实验法26
211人体肿瘤动物体内移植的基本原则26
212实体瘤动物模型的建立和药物疗效评价27
213非实体瘤动物模型的建立和药物疗效评价29
22抑制肿瘤增殖作用的体外实验方法29
221肿瘤细胞的培养30
222评价方法31
23抑制诱癌作用的观察33
231诱癌动物模型的建立33
232诱癌的体外模型建立34
24抗肿瘤转移作用的实验方法35
241转移体内模型的开发与评价35
242肿瘤细胞实验转移体内模型的建立38
243肿瘤细胞转移体外模型的建立39
244培养小室模型建立癌细胞移动实验模型42
245重层培养肿瘤细胞三维模型的建立43
246肿瘤细胞浸润能的分析——复合培养法在体外建立癌细胞浸润模型45
247肿瘤细胞移动能的分析46
248肿瘤细胞分泌MMP的分析49
249抑制肿瘤血管新生作用的实验方法54
2410肿瘤细胞Telomerase DNA的检测55
25诱导癌细胞凋亡作用的实验方法66
251诱导细胞凋亡的因素66
252细胞凋亡的检测方法67
26逆转肿瘤耐药性作用的实验方法81
261肿瘤耐药性作用的机制与原理81
262逆转肿瘤多药耐药性作用的药物筛选法82
参考文献104
第3章抗衰老药理实验方法107
31抗皮肤衰老作用的实验方法107
311皮肤组织的细胞培养107
312紫外线损伤皮肤模型的建立109
32寿命试验法110
321果蝇寿命延长试验法110
322家蚕寿命延长试验111
323二倍体细胞寿命试验111
33抑制自由基药理实验方法112
331自由基损伤细胞的体外模型建立112
332自由基测定法113
333氧化应急相关基因NFκB的检测124
参考文献127
第4章抗炎和免疫抑制药理实验方法128
41抗自身免疫性疾病的体外模型建立128
411原代培养小鼠脾脏淋巴细胞的刀豆蛋白增殖模型128
412原代培养小鼠脾脏淋巴细胞的脂多糖增殖模型129
413大鼠脾脏DC细胞的制备129
414小鼠腹腔巨噬细胞的制备130
415体外混合淋巴细胞反应模型131
416相关细胞因子的测定131
42抗自身免疫性疾病的体内模型建立132
421自身免疫性肝炎132
422实验性免疫性肝纤维化140
423溃疡性结肠炎152
43变应性鼻炎163
431卵白蛋白诱导163
432豚草花粉诱导164
433蒿属花粉诱导164
434二异氰酸甲苯酯（TDI）诱导165
435观察指标165
44支气管哮喘168
441哮喘动物模型168
442观察指标172
45自身免疫性甲状腺炎174
451动物模型的建立175
452观察指标175
46类风湿性关节炎180
461疾病实验模型的制作180
462指标观察183
47系统性红斑狼疮188
471实验模型188
472指标观察——IL10的测定191
48血小板减少性紫癜191
481免疫学造模基本程序191
482免疫性血小板减少性紫癜家兔模型192
483免疫性血小板减少性紫癜小鼠模型192
484其他造模方法193
485中医证候模型193
486体外实验194
487观察指标194
49子宫内膜异位症196
491手术造模196
492在体模型197
493离体模型198
494指标检测199
参考文献203
第5章常见抗肝损伤与抗肝纤维化药理实验方法206
51急性肝损伤药理实验方法206
511模型制备206
512指标观察208
52肝纤维化模型与药理实验方法211
521常见模型制备方法与特点211
522主要研究内容与方法214
53非酒精性脂肪肝模型及其药理实验方法221
531常见模型制备方法与特点221
532观察指标224
54肝细胞分离培养与肝细胞损伤体外实验226
541肝细胞分离培养227
542肝细胞损伤模型诱导227
543主要观察内容与方法228
544注意事项229
55肝细胞凋亡药理实验方法229
551模型建立229
552检测方法232
56肝星状细胞分离培养与肝星状细胞活化体外实验方法234
561肝星状细胞分离培养方法235
562肝星状细胞活化模型诱导237
563观察指标238
参考文献241
第6章降糖药理实验方法244
61糖尿病动物模型244
611Ⅰ型糖尿病动物模型244
612Ⅱ型糖尿病动物模型246
62降糖药物药效评价方法250
621空腹血糖测定250
622糖耐量试验250
623胰岛素敏感性250
63细胞水平降糖药物筛选方法252
631脂肪细胞、骨骼肌细胞葡萄糖消耗及葡萄糖转运实验252
632HepG2细胞葡萄糖消耗实验253
633胰岛β细胞促胰岛素分泌实验253
64分子水平降糖药物筛选方法253
641α糖苷酶抑制剂筛选254
642蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制剂筛选254
643二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)抑制剂筛选254
644醛糖还原酶抑制剂筛选255
65降糖药物筛选的靶点255
651胰岛素及其类似物255
652α2肾上腺素受体拮抗剂255
653ATP敏感的K+通道255
654血糖调节剂256
655胰岛素增敏剂256
656α葡糖苷酶抑制剂256
657诱导型一氧化氮合酶抑制剂256
658蛋白质酪氨酸磷酸酶1B抑制剂256
659二肽基肽酶Ⅳ（DPPⅣ）抑制剂256
6510肉碱脂酰转移酶抑制剂256
6511磷酸二酯酶抑制剂256
6512基质金属蛋白酶（MMP）抑制剂257
参考文献257
第7章降血脂与降血压药理实验方法259
71高脂血症实验动物模型的建立259
711高脂饲料诱发高脂血症动物模型259
712非喂养法诱发高脂血症动物模型263
72调节血脂作用的药效学实验方法264
721血脂含量的测定264
722超速离心法对实验动物进行脂蛋白的分离提取269
723载脂蛋白含量测定270
724几种血清载脂蛋白测定方法271
725低密度脂蛋白受体活性的测定274
726脂质过氧化物LPO的测定277
727瘦素和胰岛素的测定278
728血液宏观流变学实验方法——血液黏度测定法278
73实验性高血压动物模型建立及药效学观察279
731实验性高血压实验模型的建立279
732观察指标286
参考文献298
第8章抗血栓与抗动脉硬化药理实验方法300
81血管内皮细胞的功能及其在药理药效研究中的意义300
82血管内皮细胞的分离培养301
821分离牛的主动脉血管内皮细胞301
822分离和培养人脐动脉、脐静脉血管内皮细胞301
83血管内皮细胞的损伤模型建立302
831胆固醇对血管内皮细胞的损伤模型建立302
832血管内皮细胞的氧化活性物质损伤模型建立303
833血管内皮细胞的DPPH损伤模型建立305
834活体血管内皮细胞损伤模型的建立305
835大鼠主动脉血管内皮损伤模型的建立306
84血管内皮细胞分泌功能测定306
841血管内皮细胞分泌活性物质的收集306
842血管内皮细胞分泌活性物质的测定307
843血管内皮细胞分泌功能的电泳分析312
844血管内皮细胞分泌功能的相关基因分析315
85血管平滑肌细胞的分离培养321
851血管壁生长控制321
852血管内皮细胞对平滑肌细胞功能的调节321
853血管平滑肌细胞在抗动脉硬化药物研究中的应用322
854血管平滑肌细胞的分离培养323
855抑制血管平滑肌细胞增生作用的实验方法323
参考文献324
第9章神经系统药理实验方法325
91神经细胞原代培养325
911神经细胞原代分散培养325
912神经元细胞原代培养327
913神经胶质细胞培养329
914分离细胞悬液的接种密度和活性评估333
915培养神经细胞的鉴别与定性335
92培养神经细胞的病理模型336
921低氧低糖模型336
922谷氨酸毒性模型336
923氧应激模型337
924高钾毒性模型338
925机械损伤338
926NO毒性模型339
927Aβ毒性模型339
928血红素损伤模型340
93神经干细胞研究方法学341
931神经干细胞培养的原理及分离方法341
932胚胎神经干细胞培养法342
933神经干细胞的冷冻保藏与复苏344
934神经干细胞的免疫组织化学鉴定法344
935待测药物对神经干细胞增殖、分化的影响345
94脑片膜片钳研究技术与方法347
95学习、记忆的研究方法353
951回避反应实验353
952迷宫实验355
953操作式条件反射359
954记忆障碍动物模型361
955给药方案、对结果的评价及有关问题362
96痛觉模型及测定363
961物理性疼痛模型363
962化学性刺激模型366
963内脏痛369
964神经源性疼痛372
965受体水平评价阿片类化合物活性376
97抗焦虑药物研究方法383
971大鼠高架十字迷宫实验383
972大鼠高架T型迷宫384
973明暗穿箱实验384
974大鼠开场实验385
975大鼠咬木塞试验385
976大鼠群居接触实验385
977分离发声实验386
978大鼠Vogel冲突实验386
979孔板实验387
9710大鼠条件性防御掩埋实验387
9711小鼠四板法388
9712大鼠电击足部的僵住行为法388
9713新异刺激抑制大鼠进食法388
98阿尔茨海默病及有关痴呆研究模型388
981神经细胞培养389
982Aβ毒性模型建立389
983动物模型389
984胆碱能损伤致痴呆模型391
99脑缺血动物实验模型392
991全脑缺血动物模型392
992局灶性脑缺血模型395
993缺血性脑损伤的评价方法401
994动物模型中缺血性脑损伤的影响因素403
910帕金森病动物模型405
9101MPTP 模型405
91026羟基多巴胺（6OHDA）模型407
9103鱼藤酮模型408
9104果蝇模型409
911抗癫痫惊厥药物在体实验方法410
9111急性实验性惊厥模型410
9112慢性实验性癫痫模型411
9113原发性实验性癫痫模型415
912抑郁动物模型418
9121应激模型418
9122神经生化模型423
9123遗传型抑郁动物模型427
9124孤养或分养动物模型429
9125其他动物模型430
913大鼠记录突触可塑性的方法432
9131脑片上记录LTP的方法434
9132在体LTP437
914中枢神经通路损毁方法442
9141电解损毁法442
9142化学损毁法443
9143手术损毁法445
9144外周神经的损伤445
915药物依赖性实验446
9151身体依赖评价模型446
9152精神依赖性评价模型449
9153离体回肠纵肌实验模型453
916镇静、催眠作用研究方法454
9161镇静作用研究454
9162催眠作用研究455
917中枢给药方法457
9171小鼠脑室给药法458
9172大鼠侧脑室给药法458
9173大鼠脑内神经核团给药法458
9174脑室灌流法459
9175微量透析泵460
参考文献461
第10章透皮吸收作用的实验方法467
101透皮吸收作用的评价467
1011皮肤的生理构造467
1012影响透皮吸收的生理因素467
102透皮吸收作用的测定方法470
1021透皮吸收作用的in vitro测定方法470
1022透皮吸收作用的in vivo测定方法474
参考文献478
第11章造血系统药理实验方法480
111常见造血系统疾病的动物模型480
1111再生障碍性贫血小鼠动物模型的建立480
1112小鼠溶血性贫血动物模型481
1113大鼠缺铁性贫血动物模型1481
1114大鼠缺铁性贫血动物模型2482
1115免疫性血小板减少性紫癜动物模型482
1116小鼠体内血栓形成动物模型483
1117人急性髓系白血病原代白血病细胞SCID小鼠模型483
1118人T淋巴细胞白血病细胞裸小鼠异种移植模型的建立484
1119SCID人类急性早幼粒细胞白血病（APL）动物模型的建立484
11110白细胞减少症动物模型485
11111同源移植和异源移植动物模型485
112造血系统药物体外筛选模型487
1121常用造血系统细胞条件培养液的制备487
1122造血干/祖细胞体外半固体培养支持物制备488
1123红系祖细胞集落刺激活性药物筛选488
1124粒单系集落刺激活性药物筛选489
1125巨核系造血祖细胞集落刺激活性药物筛选490
1126骨髓细胞增殖模型490
1127骨髓细胞长期培养模型490
113造血系统相关指标测定491
1131骨髓细胞凋亡及细胞周期测定491
1132骨髓细胞CD34抗原检测492
1133骨髓组织学观察492
1134骨髓单个核细胞分离纯化493
1135脾集落形成单位（CFUS）测定493
1136BMMNC的分离493
1137CFUF培养及计数493
1138BMSC层黏附能力测定494
参考文献494
第12章中医证的模型实验方法495
121病证结合模型495
1211高血压脑出血肝阳上亢证495
1212黄疸病阴黄证496
1213心力衰竭肾阳虚证496
1214多发性肌炎脾虚证497
1215卵巢癌气虚血瘀证498
1216高脂血症气郁血瘀证498
1217眩晕气虚血瘀证499
1218血栓形成血瘀证500
1219多发梗死性痴呆脾虚浊瘀证500
122中医证的模型501
1221寒凝血瘀证501
1222脾胃湿热证501
1223胃热证502
1224心气虚证502
1225脾不统血证503
123证本质研究503
1231心肌缺血503
1232脾阴虚证504
1233肾阴虚证505
1234寒、热、脾虚、肾虚型乳腺癌模型505
1235继发性红细胞增多症506
1236失眠模型507
124小结507
参考文献508
|
|
主站 | 书店 | 社区 | 百科 | 教学