本书原著为第二版，是一部经典的实用技术手册。原著由脂质体各个研究领域的权威专家编写，内容覆盖脂质体技术的所有关键技术。
全书分为两大部分：第一部分提供了几乎脂质体研究基本技术的全部实验细节，包括脂质体的制备、表征和贮存；脂质体包封药物；对脂质体表面进行修饰从而控制脂质体在生物环境内的行为；长循环脂质体以及阳离子脂质体作为转染载体的应用。第二部分重点介绍脂质体应用的具体领域，包括pH敏感脂质体；诊断造影脂质体；脂质体DNA疫苗；脂质体的恒温滴定量热测定以及囊泡型磷脂凝胶。
对手有经验的研究人员来说，本书是不可多得的实验手册和参考指南，同时，对子刚刚步入这一领域的研究者来说，本书亦是理想的入门书籍。
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距第一次将脂质体技术相关方案整理为《脂质体：实用技术》一书的出版已经过去10多年。Roger New博士收集和编辑了一系列非常实用的实验方案，满足了那些在脂质体研究及应用领域中虽年轻但成长快速的科学群体的需要。由于以前没有类似的书可用，所以New博士的书一直为脂质体专家们所认可, 而且多年来将其作为寻找实践知识的资源。自第一版出版后，在已建立的脂质体研究领域中又出现了许多新方案，也出现了许多新的拥有自身全新实验方案的脂质体研究领域，同时许多新的研究者加入脂质体学这一挑战领域中来。但新一版有关脂质体“实践”一书的编写，一直悬而未决。New博士自己也清楚地意识到了研究者们对最新版本的需求，几年前他就开始与牛津大学出版社的工作人员共同从事新书的写作，并已为新书收集了几个章节。
但由于个人原因， New博士未能完成这一新版，出版商建议我们继续完成这本由他发起编写的书。我们非常理解人们对这样一本书的高度需求，因此接受了此提议，决定对New博士代表作中的章节进行更新，并对其进行扩展，我们增加了一系列新章节是对脂质体研究中新领域的介绍。我们还联系了许多脂质体研究领域的主要科学家，向他们约稿，他们非常赞成并给予鼓励，使得我们成功收集了脂质体科学关键领域的一系列杰出稿件。本书的最终结构如下。
本书第一部分包括10章，覆盖了大量重要研究领域内的重要实验方案，包括脂质体的制备；脂质体的表征；不同物理方法在脂质体研究中的应用；脂质体的灭菌、稳定性、贮存；脂质体包封药物；根据不同目的对脂质体表面进行修饰，其中包括制备靶向脂质体；长循环脂质体；脂质体在生物系统内的行为以及脂质体作为转染载体的应用。
本书的第二部分包括5章，讲述了研究和应用脂质体的一些具体领域。这部分所含章节涉及一些特殊专题，包括pH敏感脂质体、诊断造影脂质体、脂质体DNA疫苗、脂质体的恒温滴定量热测定以及囊泡型磷脂凝胶。
我们还在本书中附上了一些供应商的名单，并提供了主题索引。
目前，脂质体学仍是在不断发展的领域，而且其前景极其广阔，因此即使有本领域的重要科学家参与，也不可能仅在一本书中收集到覆盖脂质体制备、性质和应用所有方面的系列论文。编辑们意识到某些读者可能会因为在本书中找不到某些所需的方案而感到失望，但我们坚信每位从事这个富有挑战性的研究领域的人，特别是那些刚刚开始科学生涯的人们，都将会把本书作为在大量脂质体相关领域中寻找关键方案的有用资源。如果确是这样，而且本书是真正的实用手册，那么所有的荣誉都应属于此书的撰稿者，编者们愿为所有的遗漏和欠缺承担责任。敬请读者批评指正。
VT
VW
Boston,Massachusetts
2002年6月 |
制备方法3
手摇法制备多层脂质体5
超声法制备脂质体6
冻干再水化脂质体（FRV）制备过程中包封标记转铁蛋白8
逆相蒸发法制备脂质体9
以交叉过滤法去除表面活性剂制备脂质体12
挤出法制备脂质体94
脂质体的纯化19
凝胶过滤法分离蛋白脂质体20
分离REV蛋白脂质体中未结合的蛋白质21
微柱离心法分离脂质体与低分子质量物质21
脂质体组分的化学分析25
Bartlett法测定无机磷酸盐26
Stewart法测定磷脂27
脂质的TLC28
（磷）脂的HPLC分析31
胆固醇和α生育酚的HPLC分析33
脂肪酸的GC分析35
UV吸收法测定共轭二烯和三烯36
TBA法测定内过氧化物37
碘量法测定氢过氧化物38
脂质体的物理表征40
微柱离心法41
鱼精蛋白聚集法42
偶氮砷Ⅲ法测定释放率45
羧基荧光素脂质体的制备和应用48
含葡萄糖脂质体的制备和应用49
其他方法57
Bligh和Dyer萃取法57
SepPak微柱萃取58
羧基荧光素溶液的配制59
钙黄绿素溶液的配制60
DSC测量的实际问题66
脂质体的DSC研究68
脂质体的HSDSC研究69
冻干脂质体的MTDSC研究71
荧光分析法研究脂质体融合81
测定脂质体水性内容物混合的铽/二吡啶羧酸分析法82
逆相蒸发法制备大单层脂质体84
小单层脂质体的制备85
磷酸盐分析法测定融合分析用脂质体的磷脂浓度86
ANTS/DPX融合分析87
NNBDPE/NRhPE RET分析法测定膜融合过程的脂质混合89
荧光分析测定内侧单分子层的混合91
荧光法检测蛋白质与磷脂膜的结合93
蛋白质结合引起的芘单体荧光强度变化的测定94
挤出法制备脂质体94
色氨酸淬灭实验96
脂质体作为pH传感器研究细胞相互作用97
将Pyranine包封于脂质体中用作细胞摄取的探针98
荧光分光光度法研究脂质体的细胞摄取99
荧光显微法研究脂质体的细胞摄取101
用脂质体双荧光团法测定细胞内pH103
双光子激发荧光显微法检测巨大型脂质体中的脂质相104
巨大型单层脂质体（GUV）的制备106
脂质体的冻干120
脂质体的冻干126
磷脂浓度的测定130
磷酸盐分析法测定磷脂浓度131
用确定孔径的聚碳酸酯膜挤出制备大单室脂质体132
挤出法制备LUV［DSPC/Chol，（55∶45）］132
弱碱性药物基于跨膜pH梯度在LUV中积聚133
弱碱性药物（如阿霉素）主动载入具跨膜pH梯度的LUV135
弱碱性药物（如环丙沙星）主动载入具跨膜铵梯度的LUV137
弱碱性药物（如长春新碱）经离子载体介导而载入具跨膜离子梯度的LUV139
包封基因药物的脂质体系统：用于体内递送基因和反义寡核苷酸的长循环载体140
通过表面活性剂透析法将质粒DNA包封入稳定的质粒脂质粒子（SPLP）141
通过聚核苷酸“乙醇依赖”摄入预制囊泡工艺将反义寡核苷酸包封入
稳定的反义脂质粒子（SALP）144
蛋白质和多肽连接到脂质体表面149
用酸酐对PE进行衍生化151
心肌磷脂的衍生化152
有表面活性剂存在下，用NGPE对抗体进行疏水化，再通过透析法将其
插入脂质体153
无表面活性剂存在下，用PE或CL酰基衍生物对蛋白质进行疏水化，再将
其插入REV脂质体153
蛋白质固定于含有NGPE的预制脂质体表面155
将水溶性多肽共价偶联到脱水再水化脂质体上155
脂质体的高碘酸盐偶联法156
NPDPPE的合成158
蛋白质的巯基化（以IgG为例说明）159
影响偶联反应效率的因素160
SAMSA/SATA修饰蛋白质164
将碳水化合物（糖）或其他小分子结合于脂质体表面166
将糖衍生物共价偶联于预制含NGPE的脂质体167
脂质体结合糖的定量分析168
将诊断用金属原子连接于脂质体表面168
DTPA二硬脂酰酯的制备169
DTPA二硬脂酰硫酯的制备169
DTPA二硬脂酰胺的制备（在VPT实验室完成）170
DTPA磷脂酰乙醇胺（DTPAPE）的制备170
另一制备DTPAPE的方法（在VPT实验室完成）171
多螯合聚合物的制备171
在DTPA硬脂酰胺（DTPASA）上负载Gd172
在DTPA硬脂酰酯（DTPASE）上负载Gd174
在DTPAPLLNGPE上负载Gd（在VPT实验室完成）174
在含DTPA的脂质体上负载Gd174
在含DTPA的脂质体上负载99mTc175
用111In标记含螯合剂的脂质体（在VPT实验室完成）175
空间保护聚合物（PEG）与脂质体相连接179
用PEG 羟基琥珀酰亚胺酯制备PEGPE180
用PEG琥珀酸酯合成PEGPE180
用羰二咪唑合成PEGPE181
合成PEG琥珀酸半胱酰胺，与含有间马来酰亚胺N羟基琥珀酰亚胺酯
DPPE衍生物（MBPE）的预制脂质体表面连接181
不同配体与脂质体中接技聚合物的远端相连184
PEPEG酰肼(PEGPEHz)的合成188
将氮端为Ser或Thr的肽连接到脂质体中PEPEGHz远端的酰肼基上189
将经高碘酸氧化的抗体与含有HzPEGPE的脂质体相连接190
PDPPEGPE的合成190
马来酰亚胺丁酸苯酯抗体（MPBAb）的合成191
抗体与含有PDPPEGPE的脂质体相连接192
顺丁烯二酰亚胺PEGPE的合成192
COOHPEGPE的合成193
抗体与含有COOHPEGPE的脂质体相连194
配体与pNPPEGPE相连195
低聚糖(SLX)PEGDSPE的合成196
Sialyl Lewisx(SLX)PEGDSPE的合成196
寡肽(YIGSR)PEGDSPE的合成197
氨基PEGDSPE的合成199
叶酸PEG2000DSPE的合成200
生物素PEGDSPE的合成201
通过将混有配体脂质聚合物的脂质水化并挤出制备携有配体的脂质体（PHPC/
胆固醇/mPEGDSPE/配体PEGDSPE，物质的量比55∶40∶3∶2）202
将配体PEGDSPE插入到预制脂质体中202
脂质体表面上可解离的PEG203
制备带有可解离PEG包衣的pH敏感脂质体203
脂质体与细胞的相互作用208
培养细胞对脂质体的结合和摄取211
用胶原蛋白酶灌注法分离和纯化肝实质细胞、枯否细胞和内皮细胞214
由大鼠肝分离的肝实质细胞、枯否细胞和内皮细胞的培养216
脂质体的生物学分布217
从血清中重新分离脂质体218
大鼠体内脂质体组织分布的测定220
大鼠器官内脂质体分布的定性测定221
质粒DNA的分离230
氯化铯离心法分离质粒DNA230
质粒DNA浓度的定量231
Hoechst荧光分析232
紫外分光光度法测定质粒DNA的浓度232
脂质转染（Lipofection）233
方法242
逆相蒸发挤出法制备FITC右旋糖酐pH敏感脂质体（DOPE/CHEMS，
3∶2，物质的量之比，50mmol/L脂质，2mL）242
采用冻融挤出法制备HPTS或HPTS/DPX pH敏感脂质体（DOPE/
CHEMS， 3∶2物质的量之比；50mmol/L脂质，1mL）243
pH敏感脂质体的稳定性244
用显微技术或流式细胞仪分析研究pH敏感脂质体与细胞的结合245
pH敏感脂质体的胞吞作用246
γ发射放射性核素标记脂质体的方法252
谷胱甘肽HMPAO后装法 99mTc标记脂质体254
图像采集和分析方法257
动物静脉注射放射标记脂质体后的成像研究258
以γ井型计数器测定组织生物学分布260
放射标记脂质体静脉注射后在动物体内的组织生物学分布研究260
临界胶束浓度的评价268
表面活性剂的恒温微量滴定——CMC的测定269
数据分析269
表面活性剂双分子层膜平衡270
表面活性剂向膜内的分配273
脂质体增溶274
囊泡型磷脂凝胶的制备278
用单一脂质制备VPG278
用两种或多种脂质制备VPG279
VPG的载药280
亲水性化合物（吉西他滨）在VPG中的被动载药280
VPG的表征282
VPG药物的体外释放评价283
由VPG制备SUV分散体284
VPG转变为脂质体分散体284
采用脱水再水化法将质粒DNA包封于脂质体中292
MLV和SUV的制备293
脂质体包封质粒DNA293
DNA包封率的评价294
减少包封DNA的DRV脂质体粒径295
缩略语
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对手有经验的研究人员来说，本书是不可多得的实验手册和参考指南，同时，对子刚刚步入这一领域的研究者来说，本书亦是理想的入门书籍。
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